食品及醫藥品的生產會使用到微生物。這是因為使用微生物的發酵食品及醫藥品等對人體有益。但如果過程中有預期外的微生物繁殖,可能導致腐敗或汙染而損及產品品質,而對消費者的健康有害。
在此介紹黴菌(絲狀真菌)及細菌等的基礎知識,以及能提升食品及醫藥品品質管理、品質保證及研究開發的精準度與效率,使用4K數位顯微鏡來觀察、分析微生物的最新案例。

提升觀察、分析微生物(黴菌及細菌等)的效率

代表性的微生物種類

在此說明有效應用於食品與醫藥品生產,以及可能導致品質降低的代表性微生物種類。

細菌

「細菌」是由1個細胞構成的單細胞生物,屬於染色體(DNA)未經包覆,直接存在於細胞中的「原核生物」。只要有營養來源,它就能複製出與自己相同的細菌來進行增殖。這稱為「自我複製能力」。一般細菌的尺寸約在1 μm左右,可以使用顯微鏡來觀察。
對人類有用的細菌包含乳酸菌、納豆菌、醋酸菌等。另一方面,能引起人類疾病的代表性細菌包含大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、結核桿菌等,發病後用來擊退這些細菌的醫藥品則有抗菌藥(抗生素)。在用來調查食品等產品品質的檢查中,將會調查當中有無引起疾病的細菌,以及這些細菌隨時間經過增殖的程度。

真菌

黴菌、酵母及蕈類等屬於「真菌」,是一種染色體(DNA)存在於核中,受到核膜包覆的「真核生物」。有時也會將黴菌總稱為真菌。其尺寸約在5 μm左右,大致落在人類細胞與細菌的中間。

絲狀真菌

「絲狀真菌」屬於真菌中的一種,指的是像黴菌及蕈類等,具備由菌絲聚集而成的形態的菌。菌絲指的則是構成菌類主體的絲狀結構。

酵母菌

「酵母菌」指的是屬於絲狀真菌卻不具備菌絲結構,有著圓形外觀的菌。大多能在無氧的狀態下將糖分解成酒精與二氧化碳;而在有氧的狀態下則能合成各種胺基酸。人們自古便利用它們的這些性質來釀酒,製造味噌、醬油、麵包等。實際使用的代表性酵母菌種類包含啤酒酵母、清酒酵母、葡萄酒酵母、麵包酵母、藥用酵母(乾燥酵母)等。

麴菌

「麴菌」是一種源自東亞及東南亞的絲狀真菌,會用來製造麴,也會搭配酵母菌來釀酒等。麴菌會先發揮功效分解米、麥、大豆等物質,製造出糖及胺基酸,再由酵母菌分解糖及胺基酸。日本自古便運用麴菌的特性來製造酒、味噌、醬油及食用醋等。

芽孢形成菌

「芽孢形成菌」指的是對熱處理具備耐熱性的細菌,又稱耐熱性細菌。其中會形成芽孢的代表性食物中毒菌包含仙人掌桿菌、產氣莢膜桿菌、肉毒桿菌。芽孢是菌體中產生的結構,具有硬殼。一旦遇到高溫、乾燥、營養狀態不佳等不適合菌生存的環境,它就會形成芽孢。因此,如果食品經過洗淨、調理、加熱殺菌等製程後,當中仍殘留芽孢,就可能引起產品變質或是食物中毒。

微生物(細菌、真菌)的尺寸與觀察、分析的課題

下圖比較了細菌、真菌及人類細胞的尺寸比較。細菌屬於結構單純的單細胞生物,大小只有結構複雜的人類細胞的1/10。此外核中內含染色體,具有核膜的真菌尺寸則大約在兩者之間。

A:細菌 B:真菌 C:人類細胞 D:病毒
A
細菌
B
真菌
C
人類細胞
D
病毒

觀察、分析微生物的課題

細菌及真菌都是只有1至5 μm的微生物,需要以顯微鏡放大觀察增殖後的模樣進行評估,或正確計數形成的微小菌落來計算出菌數等,作業的內容既精密又高難度。
因此,必須在最佳的照明條件下取得高倍率且清晰捕捉目標物的影像。但多數微生物的透明度高,與背景的對比也低。且絲狀真菌會成長為立體形狀,難以對焦於整體,進行清晰的觀察。若遇到尺寸小的細菌,要找出高倍率觀察條件或執行正確定量分析的難度就會更高。

以往這些作業的觀察者、分析者都需要具備相當高的技能與經驗,即使是熟練的人員,從找出條件到獲得分析結果也需要耗費許多的心力及時間。綜合以上因素,獲得人材及管理工時便成為重大難題。

觀察、分析微生物時的4K數位顯微鏡應用案例

以清晰影像觀察微生物執行無偏差分析的難度在以往相當高。
KEYENCE解決了以往的各種難題,開發出能透過簡單操作實現高階觀察及分析的次世代數位顯微鏡。
超高精細4K數位顯微鏡「VHX系列」能兼顧光學顯微鏡20倍以上的景深與高解析度,採用獨創的觀察系統,透過簡單的操作運用最尖端的光學系統、4K CMOS及豐富的功能。

在此介紹運用「VHX系列」觀察、分析細菌、黴菌及酵母菌等微生物的案例。

細菌的觀察

大腸桿菌及金黃色葡萄球菌等單細胞細菌進入人體後可能有害健康。而因為只有1 μm大,所以要觀察能表示其增殖情形的菌落時,就需要明顯的對比並使用高倍率觀察。但細菌具備穿透性,不易尋得理想照明條件,因此以往觀察時往往需要高度的技術與許多時間。

4K數位顯微鏡「VHX系列」只要1台就能實現豐富的照明條件。還搭載了「多重照明」功能,1鍵即可自動取得多張以全方位照明拍攝的影像資料。選擇符合目的之影像後便能立即開始觀察。在簡化以往尋找條件的複雜過程的同時,也大幅縮短了尋找條件耗費的時間。
就連與背景對比低、以往難以觀察的細菌,也能運用穿透偏光照明及同軸側射照明等來觀察。
使用可擷取多張快門速度不同的影像來取得高灰階影像的「HDR(High Dynamic Range)」功能,即可透過以往無法獲得的高精細且高對比4K影像來觀察細菌。

4K數位顯微鏡「VHX系列」的細菌觀察
穿透偏光照明(200×)
穿透偏光照明(200×)
同軸側射照明 + HDR(2500×)
同軸側射照明 + HDR(2500×)

細菌的觀察與自動分析

4K數位顯微鏡「VHX系列」可高精細的4K影像高倍率觀察細菌後直接執行自動分析。
只需指定範圍,「自動面積量測、計數」功能就能正確計數細菌,除了面積、周長、最大直徑、最小直徑以外,還能自動量測與計算選擇範圍中細菌的面積平均值、標準偏差、最大值、最小值、面積率等,並以清單顯示詳細數值。
也能排除選擇範圍中不必要的目標物或分離重疊的目標物,並以任意的閾值執行二值化,輕鬆實現高精度的分析與定量評估。

「VHX系列」可直接安裝Excel,無需透過電腦就能使用任意的範本來輸出影像及數值、自動編製排版報告。
因此能大幅省下過去需要耗費大量精力與時間的一連串作業。

4K數位顯微鏡「VHX系列」的細菌觀察與自動分析
觀察影像:透射照明(1000×)
分析畫面:自動面積量測、計數

黴菌與其孢子、菌絲的觀察

只要1台4K數位顯微鏡「VHX系列」就能以高精細的4K影像因應各種觀察條件。此外只要運用「多重照明」功能,僅需1鍵簡單操作,即可在各種照明條件下進行觀察。還有大景深可對焦於孢子及菌絲等立體的目標物。
在此介紹運用「VHX系列」實現的豐富照明條件、高性能鏡頭及4K CMOS來觀察黴菌及其孢子、菌絲的案例。

4K數位顯微鏡「VHX系列」的黴菌之高倍率觀察
透射照明(1000×)
透射照明(1000×)
4K數位顯微鏡「VHX系列」的黴菌孢子之觀察
環狀照明(200×)
環狀照明(200×)
4K數位顯微鏡「VHX系列」的寵物食品中黴菌繁殖觀察
環狀照明(100×)
環狀照明(100×)
4K數位顯微鏡「VHX系列」的藻類中菌絲生長觀察
透射照明(100×)
透射照明(100×)

酵母菌菌落的自動計數

即使如酵母菌的菌落一樣微小的目標物,4K數位顯微鏡「VHX系列」也能取得清晰的高倍率4K影像。
只要對取得的高解析度影像運用「自動面積量測、菌落計數」功能,就能在指定範圍中正確且毫無偏差地執行。能以目的閾值執行二值化處理,也能一一分割顯示任意範圍中的菌落影像,或以柱狀圖顯示每片面積的分布等,透過各種顯示方法來大幅提升分析效率。

即使不使用電腦,也能直接在本體安裝Excel,輸出資料。只要事先準備範本,就能依據輸出的菌落數來計算出菌數,並連同影像一起自動顯示於報告中。
「VHX系列」可透過簡單的操作執行這些多元的功能,僅需1台裝置便能迅速完成評估酵母菌的一連串作業。

4K數位顯微鏡「VHX系列」的酵母菌菌落自動計數、自動面積量測
透射照明(2000×)+ 自動面積量測、計數
透射照明(2000×)+ 自動面積量測、計數

液體中的微生物觀察

4K數位顯微鏡「VHX系列」不論各種試料形態都能發揮高性能與高功能。
以下為透過4K影像觀察液體中微生物的案例。只要使用玻璃底培養皿等透光容器,即使要觀察液體中的目標物,也能運用「VHX系列」內建的背光來清晰地觀察微生物。儘管洗淨前的試料液體中混入了些許的微小異物,也能藉由高度的對焦性能來取得清晰的4K影像,並進行觀察。

4K數位顯微鏡「VHX系列」的液體中微生物觀察
透射照明(700×)
透射照明(700×)
4K數位顯微鏡「VHX系列」的液體中(自來水淨化前)微生物觀察
透射照明(700×)
透射照明(700×)

提升微生物觀察、分析之精準度與效率的4K數位顯微鏡

4K數位顯微鏡「VHX系列」能解決觀察、分析各種尺寸及形狀的微生物時產生的課題,並透過簡單的操作實現高階觀察及定量分析。

從以往難度較高,需要耗費大量精力與時間尋找的觀察條件,到對焦、分析的計數及量測、報告編製等一連串作業,都僅需1台就能自動執行,可消除部分作業需仰賴特定人員的問題並大幅減少工時。
「VHX系列」的高性能、功能及操作性不只能用於微生物的定量評估,還能運用在食品、醫藥品製造的品質管理、品質保證及研究開發等各種用途上。

除了本頁介紹的內容以外,「VHX系列」還具備其他多元的功能,詳細說明請下載型錄,或洽詢KEYENCE。